Kontaminasi kultur sel bisa dadi masalah sing paling umum ing laboratorium kultur sel, kadhangkala nyebabake akibat sing serius.Kontaminasi kultur sel bisa dipérang dadi rong kategori, rereged kimia kayata medium, serum lan rereged banyu, endotoksin, plasticizer lan deterjen, lan rereged biologi kayata bakteri, jamur, ragi, virus, mycoplasmas cross infection.Kontaminasi dening garis sel liyane.Sanajan ora bisa ngilangi kontaminasi kanthi lengkap, frekuensi lan keruwetan bisa dikurangi kanthi ngerti sumbere lan ngetutake teknik aseptik sing apik.
1. Bagean iki njlentrehake jinis utama kontaminasi biologis:
Kontaminasi bakteri
Kontaminasi jamur lan virus
Kontaminasi Mycoplasma
Kontaminasi ragi
1.1 Kontaminasi bakteri
Bakteri minangka klompok gedhe saka mikroorganisme sel siji sing ana ing ngendi-endi.Biasane mung sawetara mikron ing diameter lan bisa teka ing macem-macem wujud, saka bola kanggo rod lan spiral.Amarga ana ing ngendi-endi, ukuran, lan tingkat pertumbuhan sing cepet, bakteri, bebarengan karo ragi lan jamur, minangka kontaminasi biologi sing paling umum ing kultur sel.
1.1.1 Deteksi Kontaminasi Bakteri
Kontaminasi bakteri gampang dideteksi kanthi inspeksi visual budaya sajrone sawetara dina sawise kena infeksi;
Budaya sing kena infeksi biasane katon mendhung (yaiku, keruh), kadhangkala nganggo lapisan tipis ing permukaan.
Tetes dadakan ing pH medium kultur uga kerep ditemoni.
Ing mikroskop kurang daya, bakteri katon minangka cilik, obah granules antarane sel, lan pengamatan ing mikroskop daya dhuwur bisa ngatasi wangun saka bakteri individu.
1.2 Kontaminasi jamur & Virus
1.2.1 Kontaminasi jamur
Jamur yaiku mikroorganisme eukariotik saka kerajaan jamur sing tuwuh ing wangun filamen multiselular sing disebut hifa.Jaringan ikat filamen multiselular kasebut ngemot inti sing padha sacara genetis sing disebut koloni utawa miselium.
Kaya kontaminasi ragi, pH kultur tetep stabil sajrone tahap awal kontaminasi lan banjur mundhak kanthi cepet amarga kultur dadi luwih parah lan dadi mendhung.Ing mikroskop, miselium biasane filamentous, kadhangkala minangka kluster spora sing padhet.Spora saka pirang-pirang cetakan bisa urip ing lingkungan sing angel banget lan ora sopan sajrone fase dormant lan diaktifake mung nalika kondisi pertumbuhan sing tepat ditemoni.
1.2.2 Kontaminasi Virus
Virus minangka agen infèksi mikroskopis sing njupuk alih mesin sel inang kanggo reproduksi.Ukurane sing cilik banget ndadekake angel dideteksi ing kultur lan dicopot saka reagen sing digunakake ing laboratorium kultur sel.Amarga umume virus duwe syarat sing ketat banget kanggo inang, biasane ora mengaruhi budaya sel spesies saliyane inang.
Nanging, panggunaan kultur sel sing kena infeksi virus bisa nyebabake risiko serius kanggo kesehatan personel laboratorium, utamane yen sel manungsa utawa primata ditanam ing laboratorium.
Infeksi virus ing kultur sel bisa dideteksi kanthi mikroskop elektron, immunostaining karo set antibodi, ELISA, utawa PCR kanthi primer virus sing cocok.
1.3 Kontaminasi Mycoplasma
Mycoplasmas minangka bakteri sing prasaja tanpa tembok sel, lan dianggep minangka organisme replikasi diri sing paling cilik.Amarga ukurane sing cilik banget (biasane kurang saka 1 mikron), mycoplasma angel dideteksi nganti tekan kepadatan sing dhuwur banget lan nyebabake kultur sel rusak;Nganti saiki, biasane ora ana tandha infeksi sing jelas.
1.3.1 Deteksi kontaminasi mycoplasma
Sawetara mycoplasma sing tuwuh alon-alon bisa tetep ana ing kultur tanpa nyebabake pati sel, nanging bisa ngowahi prilaku lan metabolisme sel inang ing kultur.
Infeksi mycoplasma kronis bisa uga ditondoi kanthi nyuda tingkat proliferasi sel, nyuda kepadatan jenuh lan aglutinasi ing kultur suspensi.
Nanging, siji-sijine cara sing bisa dipercaya kanggo ndeteksi kontaminasi mycoplasma yaiku nyoba kultur kanthi rutin nggunakake pewarnaan fluoresensi (umpamane, Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunostaining, autoradiografi, utawa uji mikroba.
1.4 Kontaminasi ragi
Ragi minangka eukariota sèl tunggal saka kerajaan jamur, ukurane saka sawetara mikron (biasane) nganti 40 mikron (arang banget).
1.4.1 Deteksi kontaminasi ragi
Kaya kontaminasi bakteri, kultur sing kontaminasi ragi bisa dadi mendhung, utamane yen kontaminasi ing tahap lanjut.pH kultur sing terkontaminasi ragi owah-owahan sithik banget nganti kontaminasi dadi luwih parah, ing tahap kasebut pH biasane mundhak.Ing mikroskop, ragi katon minangka partikel ovoid utawa bunder lan bisa ngasilake partikel sing luwih cilik.
2. Infeksi silang
Sanajan ora umum kaya kontaminasi mikroba, kontaminasi silang akeh garis sel karo HeLa lan garis sel sing tuwuh kanthi cepet minangka masalah sing jelas kanthi konsekuensi serius.Entuk garis sel saka bank sel sing duwe reputasi, priksa kanthi rutin karakteristik garis sel, lan gunakake teknik aseptik sing apik.Praktek iki bakal mbantu sampeyan supaya ora kontaminasi silang.Sidik jari DNA, karyotyping lan isotyping bisa ngonfirmasi manawa ana kontaminasi silang ing kultur sel sampeyan.
Sanajan ora umum kaya kontaminasi mikroba, kontaminasi silang akeh garis sel karo HeLa lan garis sel sing tuwuh kanthi cepet minangka masalah sing jelas kanthi konsekuensi serius.Entuk garis sel saka bank sel sing duwe reputasi, priksa kanthi rutin karakteristik garis sel, lan gunakake teknik aseptik sing apik.Praktek iki bakal mbantu sampeyan supaya ora kontaminasi silang.Sidik jari DNA, karyotyping lan isotyping bisa ngonfirmasi manawa ana kontaminasi silang ing kultur sel sampeyan.
Wektu kirim: Feb-01-2023