Salah sawijining kaluwihan utama kultur sel yaiku kemampuan kanggo ngolah kimia fisik reproduksi sel (yaiku suhu, pH, tekanan osmotik, tegangan O2 lan CO2) lan lingkungan fisiologis (yaiku konsentrasi hormon lan nutrisi).Saliyane suhu, lingkungan budaya dikontrol dening medium wutah.
Sanajan lingkungan fisiologis budaya ora cetha kaya lingkungan fisik lan kimia, pangerten sing luwih apik babagan komponen serum, identifikasi faktor pertumbuhan sing dibutuhake kanggo proliferasi, lan pangerten sing luwih apik babagan lingkungan mikro sel ing budaya.(Yaiku interaksi sel-sel, difusi gas, interaksi karo matriks) saiki ngidini garis sel tartamtu bisa dibudidaya ing media bebas serum.
1. Lingkungan budaya mengaruhi wutah sel
Wigati dimangerteni manawa kahanan kultur sel beda-beda kanggo saben jinis sel.
Konsekuensi saka nyimpang saka kondisi kultur sing dibutuhake kanggo jinis sel tartamtu saka ekspresi fenotipe sing ora normal nganti gagal total kultur sel.Mula, disaranake supaya sampeyan kenal karo garis sel sing sampeyan minati lan tindakake pandhuan sing diwenehake kanggo saben produk sing digunakake ing eksperimen sampeyan.
2. Pancegahan kanggo nggawe lingkungan kultur sel sing dioptimalake kanggo sel sampeyan:
Media kultur lan serum (pirsani ing ngisor iki kanggo informasi luwih lengkap)
Tingkat pH lan CO2 (pirsani ing ngisor iki kanggo informasi luwih lengkap)
Budidaya plastik (pirsani ing ngisor iki kanggo informasi luwih lengkap)
Suhu (ndeleng ngisor kanggo informasi luwih lengkap)
2.1 Media Budaya lan Serum
Media kultur minangka bagian paling penting ing lingkungan kultur, amarga nyedhiyakake nutrisi, faktor pertumbuhan lan hormon sing dibutuhake kanggo pertumbuhan sel, lan ngatur pH lan tekanan osmotik kultur.
Sanajan eksperimen kultur sel wiwitan ditindakake kanthi nggunakake media alami sing dipikolehi saka ekstrak jaringan lan cairan awak, kabutuhan standarisasi, kualitas media, lan permintaan sing tambah nyebabake pangembangan media definitif.Telung jinis dhasar media yaiku media basal, media serum suda lan media bebas serum, lan nduweni syarat sing beda kanggo suplemen serum.
2.1.1 Sedheng dhasar
Media kultur sel Gibco
Umume garis sel tuwuh apik ing media dhasar sing ngemot asam amino, vitamin, uyah anorganik, lan sumber karbon (kayata glukosa), nanging formulasi media dhasar kasebut kudu ditambah karo serum.
2.1.2 Suda serum medium
Botol karo Gibco Low Serum Medium
Strategi liya kanggo nyuda efek ala serum ing eksperimen kultur sel yaiku nggunakake media sing dikurangi serum.Medium serum sing dikurangi minangka rumus medium dhasar sing sugih nutrisi lan faktor sing asale saka kewan, sing bisa nyuda jumlah serum sing dibutuhake.
2.1.3 Serum-free medium
Botol karo medium bebas serum Gibco
Serum-free medium (SFM) circumvents nggunakake serum kewan dening ngganti serum karo nutrisi cocok lan formulasi hormon.Akeh kultur primer lan garis sel duwe formulasi medium tanpa serum, kalebu jalur produksi protein rekombinan Chinese Hamster Ovary (CHO), macem-macem garis sel hibridoma, garis serangga Sf9 lan Sf21 (Spodoptera frugiperda), uga kanggo host kanggo produksi virus. (contone, 293, VERO, MDCK, MDBK), lan liya-liyane. Salah sawijining kaluwihan utama nggunakake medium bebas serum yaiku kemampuan kanggo nggawe medium selektif kanggo jinis sel tartamtu kanthi milih kombinasi faktor pertumbuhan sing cocog.Tabel ing ngisor iki nampilake kaluwihan lan kekurangan media tanpa serum.
Kaluwihan
Tambah gamblang
Kinerja sing luwih konsisten
Pemurnian luwih gampang lan pangolahan hilir
Evaluasi fungsi sel kanthi akurat
Tambah produktivitas
Kontrol reaksi fisiologis sing luwih apik
Deteksi media sel sing ditingkatake
Kakurangan
Keperluan formula medium spesifik jinis sel
Perlu kemurnian reagen sing luwih dhuwur
Slowdown ing wutah
2.2.1 tingkat pH
Umume garis sel mamalia normal tuwuh kanthi apik ing pH 7,4, lan beda antarane garis sel sing beda-beda cilik.Nanging, sawetara garis sel sing diowahi katon luwih apik ing lingkungan sing rada asam (pH 7.0 - 7.4), nalika sawetara garis sel fibroblast normal luwih seneng lingkungan sing rada alkali (pH 7.4 - 7.7).Garis sel serangga kayata Sf9 lan Sf21 tuwuh paling apik ing pH 6,2.
2.2.2 tingkat CO2
Media pertumbuhan ngontrol pH kultur lan buffer sel ing kultur kanggo nolak owah-owahan pH.Biasane, buffering iki digayuh kanthi ngemot buffer organik (contone, HEPES) utawa CO2-bikarbonat.Amarga pH medium gumantung saka keseimbangan karbon dioksida (CO2) lan bikarbonat (HCO3-), owah-owahan ing CO2 atmosfer bakal ngganti pH medium.Mulane, nalika nggunakake medium buffered karo buffer adhedhasar CO2-bikarbonat, perlu nggunakake CO2 eksogen, utamané nalika kultur sel ing piring budaya mbukak utawa culturing garis sel rubah ing konsentrasi dhuwur.Sanajan umume peneliti biasane nggunakake 5-7% CO2 ing udhara, umume eksperimen kultur sel biasane nggunakake 4-10% CO2.Nanging, saben medium nduweni tegangan CO2 sing disaranake lan konsentrasi bikarbonat kanggo entuk pH lan tekanan osmotik sing bener;kanggo informasi luwih lengkap, waca pandhuan produsen medium.
2.3 Budidaya plastik
Plastik kultur sel kasedhiya ing macem-macem wujud, ukuran lan permukaan sing cocog karo macem-macem aplikasi kultur sel.Gunakake tuntunan lumahing plastik kultur sel lan tuntunan wadhah kultur sel ing ngisor iki kanggo mbantu milih plastik sing pas kanggo aplikasi kultur sel.
Deleng kabeh plastik kultur sel Thermo Scientific Nunc (link iklan)
2.4 Suhu
Suhu optimal kanggo kultur sel gumantung banget marang suhu awak inang saka ngendi sel kasebut diisolasi, lan luwih sithik ing owah-owahan anatomi ing suhu (contone, suhu kulit bisa luwih murah tinimbang otot balung. ).Kanggo kultur sel, Overheating minangka masalah sing luwih serius tinimbang overheating.Mulane, suhu ing inkubator biasane disetel rada ngisor suhu paling luweh.
2.4.1 Suhu paling luweh kanggo macem-macem garis sel
Umume garis sel manungsa lan mamalia disimpen ing 36 ° C nganti 37 ° C kanggo pertumbuhan optimal.
Sèl serangga dibudidayakan ing suhu 27 ° C kanggo pertumbuhan sing optimal;tuwuh luwih alon ing suhu sing luwih murah lan suhu antara 27°C nganti 30°C.Ing ndhuwur 30 ° C, vitalitas sel serangga suda, sanajan bali menyang 27 ° C, sel ora bakal pulih.
Garis sel unggas mbutuhake 38,5 ° C kanggo nggayuh pertumbuhan maksimal.Sanajan sel kasebut bisa disimpen ing suhu 37 ° C, sel kasebut bakal tuwuh luwih alon.
Garis sel sing asalé saka kéwan berdarah dingin (kayata amfibi, iwak banyu adhem) bisa nahan kisaran suhu 15°C nganti 26°C.
Wektu kirim: Feb-01-2023